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原生質(zhì)體葉肉細(xì)胞瞬時(shí)表達(dá)方法

1、生長(zhǎng)培養(yǎng)好的試驗(yàn)材料（一般為生長(zhǎng)20天左右的擬南芥幼苗葉片）2、在擬南芥開花前取樣（30片葉子左右即可）3、切取葉片為0.5-1mm的細(xì)條（如果材料能達(dá)到每克107個(gè)原生質(zhì)體，10-20片葉子需要5-10mL酶解液）4、迅速將切下的樣品轉(zhuǎn)到酶解液中，要求全部浸沒。5、黑暗條件下抽真空30min。6、連續(xù)酶解，室溫下23℃黑暗中靜止酶解3h7、利用光學(xué)顯微鏡檢查原生質(zhì)體（30-50μm大小）8、在過濾前加入等量的W5溶液9、洗干凈濾網(wǎng)，并用W5潤(rùn)濕，之后過濾10、離心100...

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流式細(xì)胞技術(shù)的應(yīng)用

流式細(xì)胞術(shù)（FCM）是一種基于激光的技術(shù)，用于生物顆粒的多參數(shù)分析。隨著技術(shù)的發(fā)展，F(xiàn)CM已進(jìn)入許多使用領(lǐng)域。FCM也用于免疫表型研究。因此，它可以用于確定細(xì)胞亞群、譜系、細(xì)胞分化和激活階段以及克隆性。隨著FCM分析的發(fā)展，B細(xì)胞發(fā)育和分化的各個(gè)階段已變得可識(shí)別。此外，F(xiàn)CM已經(jīng)開始識(shí)別和表征幾個(gè)不同B細(xì)胞亞群和相關(guān)診所中的表達(dá)譜。流式細(xì)胞術(shù)分析血小板功能有較多優(yōu)勢(shì)。它可以血小板直接在全血的生理環(huán)境中進(jìn)行分析（包括紅細(xì)胞和白細(xì)胞，兩者都影響血小板活化）。樣本的簡(jiǎn)化操作可防止人...

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使用流式細(xì)胞儀檢測(cè)血小板的注意事項(xiàng)

通過使用使用流式細(xì)胞儀可以對(duì)血小板進(jìn)行信號(hào)傳遞、細(xì)胞骨架架構(gòu)、糖蛋白結(jié)構(gòu)、血小板活化反應(yīng)，糖蛋白缺陷檢測(cè)，RNA含量，血小板抗體等分析檢測(cè)。使用流式細(xì)胞儀進(jìn)行血小板分析檢測(cè)時(shí)需要注意以下幾點(diǎn)：一)抗體的選擇選擇CDWorkshop中的單克隆抗體.單克隆抗體反應(yīng)特異性高,非特異性結(jié)合少,但由于血小板富含F(xiàn)cRⅡ(CD32,FeⅡ受體),而Fc受體對(duì)不同抗體亞類具有不同親和力,所以在業(yè)類選擇上,對(duì)于人的抗體以選擇IgG1為好.二)抗凝劑的選擇盡量避免使用肝素;EDTA在室溫20~...

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細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)步驟

細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是指將細(xì)胞培養(yǎng)在培養(yǎng)皿或平板上，待細(xì)胞融合后用槍頭或其他硬物在中央?yún)^(qū)域畫一條線，這條線內(nèi)的細(xì)胞被機(jī)械力去除掉了，然后將細(xì)胞繼續(xù)培養(yǎng)，觀察細(xì)胞向無細(xì)胞的劃痕區(qū)域遷移的情況，來判斷細(xì)胞的遷移能力。其意義在于：價(jià)格低廉，操作簡(jiǎn)單，還有很重要的一點(diǎn)在于細(xì)胞外圍環(huán)境簡(jiǎn)單、單純，容易控制，是腫瘤細(xì)胞基本的研究方法。一、實(shí)驗(yàn)前準(zhǔn)備實(shí)驗(yàn)開始前，將離心管、吸管筒、移液槍、槍頭，直尺等放入無菌超凈工作臺(tái)，以紫外線照射30min。然后，采用通風(fēng)機(jī)通風(fēng)3min。取出無菌6孔板，用黑色記號(hào)...

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移液槍壞了怎么維修

移液槍是實(shí)驗(yàn)室里的常用工具，無論是分子生物學(xué)、蛋白組化免疫、細(xì)胞生物學(xué)、檢驗(yàn)機(jī)構(gòu)，科研所都經(jīng)常用到。移液器的準(zhǔn)確度很重要，稍有偏差就會(huì)對(duì)實(shí)驗(yàn)造成影響，甚至實(shí)驗(yàn)失敗。所以建議移液器的保養(yǎng)周期為1年，若長(zhǎng)時(shí)間不保養(yǎng)不僅會(huì)影響移液器的準(zhǔn)確度，還會(huì)出現(xiàn)移液卡頓，漏液、殘液等更多的問題，不當(dāng)?shù)牟僮鞣椒ㄒ矔?huì)對(duì)移液器造成不同程度的損壞。移液槍壞了怎么維修，下面小編歸納一下移液過程中的常見的問題及解決方案，以供參考。一、移液器吸液嘴內(nèi)有殘液，排液不盡：出現(xiàn)這種情況主要是因?yàn)橐埔簶寴岊^不匹配，...

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